Особенности проведения иммуноферментного анализа (ИФА)

Содержание

Описание диагностики ЗППП: иммуноферментный анализ (ИФА анализ)

Особенности проведения иммуноферментного анализа (ИФА)

Перечень доступных методик диагностики в последние десятилетия быстро расширяется, диагносты пытаются в новых методах объединить преимущества всех прежних анализов, избавившись от всех их прежних недостатков.

В последнее время все чаще в перечне диагностических процедур фигурирует иммуноферментный анализ — современный и достаточно новый тест, о котором мало известно обычному человеку, не связанному с медициной.

Тем не менее эта методика стремительно пополняет ряды своих приверженцев среди квалифицированного медперсонала.

Что она представляет собой и в каких случаях ее следует использовать, можно попытаться разобраться, ознакомившись с ее особенностями и главными характеристиками.

Суть метода

Иммуноферментное исследование — инструментально-лабораторная методика, построенная на молекулярной реакции «антиген-антитело», позволяющая обнаруживать специфичные белки в биологических материалах (образцах для исследования).  Такими белками могут быть энзимы, разнообразные микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибки), простейшие и т. д.

После открытия метода ему было дано название ELISA-тест, что не имеет отношения к имени первооткрывателей, а является аббревиатурой полного названия в английском варианте — enzyme-linked immunosorbent assay. Медики всего мира используют это название, некоторые врачи в русскоязычных странах тоже так называют этот тип исследования.

Основной принцип метода заключается в молекулярной реакции «антиген-антитело».

Антигеном является любая чужая молекула, попавшая в человеческий организм в составе микроба-возбудителя болезни. Антигены представляют собой, как правило, белковые молекулы. Кроме микроорганизмов таким «чужаком» могут быть клетки чужой крови, не совпадающие по группе или резус-фактору.

В ответ на попадание такого антигена в организме запускается иммунная реакция, которая направлена на защиту от любых чужих молекул.

Это происходит за счет синтеза специальных агентов иммунной системы — антител (иммуноглобулинов).

Каждое антитело подходит только к определенному антигену, и нейтрализует патогенного «чужака», связываясь с ним в единый комплекс. Именно процесс такого связывания и называют реакцией «антиген-антитело».

Виды антител

Все антитела (иммуноглобулины) делятся на 5 видов в зависимости от того, на каком этапе иммунного ответа они появляются:

  • Класс М (IgM). Всплеск таких иммуноглобулинов наблюдается в течение нескольких первых суток после внедрения инфекции или другого патогенного агента. Приблизительно через 6 недель они начинают растворяться и исчезать.
  • Класс G (IgG). Синтезируются на втором этапе, чтобы побороть болезнь. После полной ликвидации чужих молекул они продолжают присутствовать в крови в небольшом количестве для обеспечения иммунитета на случай повторного заражения.
  • Класс А (IgА). Такие иммуноглобулины отвечают за защитные функции слизистых оболочек организма, через которые патогенным элементам проникнуть легче всего, так как слизистый эпителий гораздо тоньше и нежнее обычных кожных покровов.
  • Класс Е (IgЕ). Эти специфические глобулины направляют свое действие против паразитарных инфекций, поражающих организм человека. Они появляются вне зависимости от того, какая система органов поражена паразитами.
  • Класс D (IgD). Этот класс всегда обнаруживается даже у здоровых людей. У детей до 10 лет он постепенно нарастает, после чего его количество при условии абсолютного здоровья не изменяется. Если же показатель увеличивается выше нормы, то это может свидетельствовать о наступившей беременности, астмы, иммунодефицита и пр.

Для ИФА-диагностики чаще всего важны уровни иммуноглобулинов IgG, IgM и IgA. По их титрам можно узнать, переболел ли человек болезнью раньше или заразился в недавнем времени, выработался ли у него иммунитет или его организм беззащитен перед патологией.

Достоинства и недостатки иммуноферментного анализа

На данный момент ИФА — один из самых точных и чувствительных методов. Он взят на вооружение специалистами в разных областях медицины и продолжает расширять сферы применения.

Преимущества метода

  • Высокая точность полученных данных.
  • Чувствительность (позволяет обнаружить необходимое вещество даже при минимальном присутствии возбудителя в образце).
  • Возможность диагностики в первые дни болезни или в инкубационном периоде.
  • Скорость получения данных в сравнении с другими методиками подобной точности.
  • Высокая автоматизация процесса и минимальное участие человека, что снижает погрешность исполнителя.
  • Получение данных о стадии патологического процесса и эффективности выбранной терапии.
  • Безболезненность и малая инвазивность при отборе материала.

Недостатки метода

  • В большинстве случаев позволяет определять ответ организма на патогенный агент, а не самого возбудителя.
  • Перед исследованием должно быть точно известно предполагаемое заболевание, так как тест высокоспецифичен.
  • Вероятность ложных показателей, вызванных техническими моментами, приемом лекарственных средств, одновременным присутствием нескольких хронических заболеваний или нарушениями обменных процессов в организме больного.
  • Интерпретацию результатов должен делать только высококвалифицированный специалист, так как для трактовки полученных данных необходимо владеть специальной подготовкой и большим запасом медицинских знаний в определенной области.
  • ИФА — достаточно редкий анализ, поэтому выполняют его далеко не во всех диагностических лабораториях.
  • Метод довольно дорогой, так как помимо реактивов в лаборатории должно быть дорогостоящее многочисленное оборудование и образцы антигенов, изготавливаемых в специальных институтах.

В каких случаях используют иммуноферментный анализ

Полный перечень показаний к назначению иммуноферментного исследования очень широк, он включает в себя практически все отрасли медицины.

Чаще всего ИФА применяют для таких целей:

  • выявление инфекционных заболеваний;
  • диагностика венерических болезней;
  • определение иммунного статуса или отдельных аутоиммунных заболеваний;
  • идентификация онкомаркеров;
  • определение гормонов.

В случае инфекционных и вирусных заболеваний методика позволяет выявить следующие патологии:

  • все типы вирусных гепатитов;
  • вирус Эпштейна-Барра;
  • все TORCH-инфекции;
  • все типы кишечных инфекций;
  • ВИЧ;
  • сифилис;
  • большинство паразитарных инфекций;
  • хеликобактериоз и пр.

Кроме того, ИФА позволяет быстро и эффективно определить инфарктное состояние, оценить репродуктивный потенциал организма, выявить аллергию, ее источник и пр.

Иммуноферментная методика используется для проведения клинических исследований в ходе разработки новых лекарственных препаратов и в оценке их влияния на организм человека.

Типы образцов и методы их отбора для исследования

Чаще всего исследуемым материалом для иммуноферментного анализа служит кровь, которую берут из локтевой вены пациента. Отбор пробы проводится натощак, преимущественно в утреннее время. После отбора из крови отделяют и убирают те форменные клетки, которые мешают проведению исследования, оставляя только сыворотку.

При диагностировании мочеполовых инфекций часто материалом становятся мазки из слизистых тканей половых органов, слизь из уретры или шейки матки, образцы из прямой кишки, соскобы с эрозий или язв в области паха и с других участков тела. Мазки могут брать и с ротовой полости, а также с носоглотки.

Иногда иммуноферментное обследование используется в акушерской и гинекологической практике во время беременности для определения состояния околоплодных вод. В таком случае образцом становится амниотическая жидкость. Для этого отбирают небольшое количество жидкости, проколов плодный пузырь длинной иглой. Все манипуляции проводят стерильным инструментом, чтобы минимизировать возможные риски.

Нередко материалом становится спинномозговая или серозная жидкость. Это происходит при местной анестезии, которая вводится инъекционно.

Уточнить, какой тип материалов необходим для иммуноферментного анализа, должен специалист, направляющий на исследование. Часто берутся образцы сразу нескольких типов или из разных мест. Про подготовку к сдаче биоматериала пациенту тоже должен рассказать врач, выдающий направление на этот тип обследования.

Подготовка к иммуноферментному анализу

Для увеличения точности данных, полученных после иммуноферментного обследования, подготовка к отбору материала должна быть такой:

  • за 10 суток до исследования исключить антибиотики, противовирусные и антимикотические препараты;
  • за сутки необходимо исключить спиртное, курение и прием наркотических веществ;
  • в этот же период необходимо избегать физического перенапряжения;
  • предупредить специалиста, выписывающего назначение, о всех лекарствах, которые пациент принимает;
  • оповестить врача в случае беременности или подозрении на беременность.

Лучше всего, если материалы для тестирования будут отобраны утром натощак.

Если диагностика ставит цель определить состояние гормонального фона, то важно обеспечить себе спокойное состояние накануне и избегать нервного напряжения. Для женщин сдача крови на гормоны четко определяется периодом месячного цикла, о чем будет сказано врачом в момент назначения.

За 2-3 дня до отбора материала нужно исключить из меню жареное и жирное, а перед анализом на гепатит не есть цитрусовые и любые другие фрукты и овощи оранжевого и желтого цвета.

Расшифровка результатов иммуноферментного анализа

Результат качественного исследования, как правило, обозначается знаками «+» (обнаружено) или «-» (не обнаружено).

По наличию или отсутствию определенных групп иммуноглобулинов можно делать такие выводы:

  • JgM (-), JgG (-), JgA (-) — иммунитет к заболеванию полностью отсутствует (с таким типом антигена организм ранее не сталкивался);
  • JgM (-), JgG (+), JgA (-) — ранее было столкновение с данным антигеном или с вакциной;
  • JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) — острый патологический процесс (скорее всего первичный);
  • JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) — процесс хронического течения;
  • JgM (+), JgG (+), JgA (+) — рецидив;
  • JgM (-) — стадия выздоровления.

Количественные значения несут большую информационную нагрузку, но трактовать их способен только лечащий врач, исходя из предыдущих показаний, возраста пациента, норм для каждого конкретного заболевания. Именно по этой причине оценивать результаты самостоятельно нельзя.

Сколько необходимо ждать результаты

Данная методика имеет много разновидностей, в зависимости от которых и определяется срок получения данных на руки. Средняя продолжительность ИФА-диагностики составляет 4-6 часов, что позволяет выдать результаты уже на следующий день.

Самые продолжительные методики занимают до 10 дней, например, в случае выявления ВИЧ-инфекции.

При острой необходимости возможно применение экспресс-методик, при которых ответ получают уже через 1-2 часа.

Где можно пройти ИФА тестирование

Поскольку оборудование для проведения такого типа диагностики довольно дорогое, то приобрести его могут не все лаборатории. Кроме того, тесты, содержащие специфические антигены, имеют ограниченный срок годности (обычно около 1 года), поэтому нуждаются в постоянном обновлении.

По этим причинам в государственных медицинских учреждениях ИФА-лаборатории есть далеко не всегда. Чаще всего необходимо обращаться в большие частные медицинские или крупные диагностические центры.

Для проведения ИФА-исследования лаборатория должна иметь специальную лицензию, а персонал и лаборанты должны пройти специальное обучение.

Чаще всего конкретный диагностический центр или лабораторию рекомендует врач, направляющий пациента на обследование.

Стоимость иммуноферментного исследования

Цена на данное исследование зависит от региона страны и от уровня клиники, предоставляющей услугу. В Москве минимальная цена за определение одного антигена стартует от 700 руб. Если необходимо выявить сразу несколько иммуноглобулинов, то цена будет суммироваться.

В случае срочного анализа стоимость увеличивается на 150-200 руб. за каждый антиген.

Несмотря на достаточно высокую стоимость, иммуноферментный анализ позволяет сделать обследование пациента максимально информативным и быстрым, что сокращает время до начала лечения и позволяет быстрее стабилизировать состояние человека.

На данном видео представлен фильм «Основы иммуноферментного анализа».

Источник: https://myvenerolog.com/analizy-i-diagnostika/immunofermentnyj-analiz-ifa-analiz.html

Иммуноферментный анализ (ИФА): цена, расшифровка, принцип метода, реакция

Особенности проведения иммуноферментного анализа (ИФА)

Представляя собой современный вид лабораторного исследования, ИФА, или иммуноферментный анализ позволяет найти в крови специфические антитела либо антигены к определенным заболеваниям.

Это позволяет обнаружить как этиологию болезни, так и определить ее стадию. При этом результаты подобного вида исследования могут выдаваться как количественно, так и качественно.

Итак, давайте рассмотрим в подробностях принцип метода иммуноферментного анализа, его методику и суть.

Что такое иммуноферментный анализ

Назначаемый для максимально полной комплексной оценки состояния здоровья, иммуноферментный анализ позволяет оценить общее состояние здоровья и дать оценку его защитным функциям. Данное лабораторное исследование позволяет диагностировать инфекционные, аутоиммунные, гематологические патологии при анализе крови.

Суть иммуноферментного анализа рассмотрена в видео ниже:

Кому его назначают

Данное исследование может быть назначены тем больным, у которых выявляется наличие следующих заболеваний:

  • аллергические реакции;
  • болезни вирусного происхождения, к которым относятся гепатиты, вирус Эпштейн-Барр, герпес, цитомегаловирус;
  • заболевания, которые передаются половым путем — хламидиоз, трихомонада, сифилис, уреаплазма, микоплазма;
  • иммунодефицит;
  • нейросифилис;
  • онкологические патологии;
  • проведение предоперационного комплексного обследования.

ИФА анализ крови назначается также для определения уровня гормонов и оценки качества проводимого вида терапии.

Врачом может быть назначен данный анализ для установки стадии имеющегося заболевания, что позволяет своевременно вносить корректировки в применяемое лечение.

А высокая точность получаемых данных позволяет иметь максимально развернутую картину здоровья.

При этом получение данных после проведенного исследования происходит в очень короткий промежуток времени, что позволяет отслеживать динамику развития патологического процесса.

Зачем сдавать такие анализы

Поскольку благодаря ИФА анализу крови можно получить значительное количество информации о состоянии здоровья и патологических процессах, происходящих в организме, именно он дает возможность наиболее полно учитывать исходные данные (общее состояние здоровья, стадия заболевания, динамика развития патологического процесса, показатель эффективность применяемой терапии) при составлении схемы лечения.

По этой причине для получения наиболее выраженного результата лечения и быстрейшего прекращения патологического процесса в организме назначается ИФА анализ крови. Серьезные заболевания иммунной системы, наличие антигенов в крови и причины аллергии на основе полученных данных можно вылечить более быстро, применяя наиболее результативные методы.

Назначение ИФА анализа проводится при множестве патологий, и делать его следует только по назначению врача. Частота проведения анализа также устанавливается врачом, и при сдаче крови для проведения ИФА анализа картина болезни наиболее полная.

Поскольку получение динамики течения болезни возможно при сдаче данного анализа более одного раза, наиболее часто может назначаться сдача крови от трех до пяти раз.

Это дает возможность сравнить количество антител в крови в различные временные промежутки.

Виды такой процедуры

Существует несколько разновидностей иммуноферментного анализа. Различаются они видом взятой жидкости из организма человека, на основании которой проводится изучение ее состава и наличия определенных антигенов.

При этом для анализа может браться не только кровь человека, но и другие его жидкости:

  • околоплодные воды,
  • спинномозговая жидкость,
  • содержимое стекловидного тела,
  • мазки,
  • слизь из уретры и цервикального канала.

Проведение самой операции по взятию определенного вида жидкости стандартный и проводится в условиях дневного стационара.

Показания для проведения

Обычно ИФА анализ назначается врачом при необходимости получения развернутой картины текущего заболевания, проходящего в любой форме: хронической, вялотекущей либо острой. И показаниями к проведению данного вида анализа могут считаться следующие состояния и лечебные цели:

  • поиск антигенов определенных заболеваний;
  • определение гормонального статуса;
  • выявление в организме вируса гепатита;
  • исследование на наличие онкомаркеров;
  • поиск антител к любому виду инфекционного заболевания;
  • обследование на наличие аутоиммунных поражений организма.

Также иммуноферментный анализ назначается для выявления наличия поражения организма гельминтами и кишечными паразитами и имеющихся аллергических проявлений. При проведении выбранного метода лечения имеющегося заболевания этот анализ позволяет увидеть динамику процесса излечения, а также внести в него необходимые корректировки.

О проведении иммуноферментного анализа смотрите в видео ниже:

Противопоказания для проведения

Противопоказаний для иммуноферментного исследования на сегодняшний день не выявлено.

При беременности, когда наблюдается постоянное изменение содержания в крови гормонов, необходимо неоднократное проведение данного анализа для подтверждения полученного результата.

Новорожденные и дети грудного возраста могут также иметь некорректные данные анализа: во время внутриутробного развития определенные виды антител могут проникать в кровь плода через плаценту матери.

Потому их наличие во взятом анализе не следует считать признаком имеющейся инфекции.

Безопасность анализов

Проведение процедуры взятия любого вида жидкости из организма человека не приносит никакого отрицательного воздействия на организм. Полная стерильность при совершении манипуляций позволяет избежать вероятность заражения любыми видами заболеваний.

Подготовка к проведению

Для получения анализа может использоваться любой вид жидкости организма человека. Однако наиболее распространенным следует считать сыворотку крови.

Кровь берется у пациента натощак, полностью исключается прием любого вида лекарств, поскольку они могут существенно влиять на общую картину результата.

Прекращение приема специфического лечения, назначаемого при антибактериальном, противовирусном, противопаразитарном воздействии, осуществляется за недели перед проведением исследования.

Для получения максимально достоверных результатов исследования следует воздержаться от употребления алкогольных напитков и наркотических препаратов перед взятием крови (либо иной жидкости) на анализ.

Как проходит процедура, ощущения во время нее

Для проведения ИФА анализа кровь у пациента берется строго натощак: следует не принимать пищу в каком-либо виде не менее чем за часов до процедуры. Анализ берется из локтевой вены.

О наличии любых заболеваний и принимаемых лекарствах сообщается врачу заранее, наиболее часто препараты на момент сдачи крови будут отменены. Ощущения во время проведения процедуры сходны со взятием крови для проведения биохимического анализа.

Далее рассмотрена расшифровка результатов и указана норма рекции иммуноферментного анализа крови.

Расшифровка результатов

ИФА-диагностика позволяет определить наличие инфекции в организме, активность патологического процесса и этиологию имеющейся инфекции. Быстрое получение результата проведенного анализа (в течение суток) — одно из преимуществ данного вида исследования.

Процесс расшифровки полученной информации осуществляет врач. При этом следует учитывать, что корректность полученных результатов по динамике любых процессов гарантируется при прохождении анализов в одной лаборатории.

Далее будет рассмотрена цена на иммуноферментный анализ (метод ИФА) крови на паразитов и иные патологии.

Средняя стоимость процедуры

Средняя цена ИФА-исследования зависит от направленности анализа и определения конкретных величин.

Так, определение серологических маркеров инфекционных заболеваний различных видов (anti-HAV IgG, anti-HAV IgM, HBsAg) будет стоить от 200 до 320 рублей и проводится в течение 2 рабочих дней.

Показатель стоимости данной процедуры считается также его преимуществом: доступность цен на любые виды исследований позволяет проводить исследование при любом размере бюджета.

Стоимость ИФА-исследования зависит от политики медицинского учреждения, однако его следует считать общедоступной процедурой, позволяющей получить развернутую картину имеющегося заболевания и обеспечить максимально полное лечение.

Про нормы и особенности ИФА-исследования смотрите в видеоролике ниже:

Источник: http://odsis.ru/dermatologiya/sposoby-diagnostiki/immunofermentnyj-analiz-ifa-tsena-rasshifrovka-printsip-metoda-reaktsiya/

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Особенности проведения иммуноферментного анализа (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) – современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови либо антигенов к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни. Результаты ИФА могут выдаваться качественно и количественно.

В настоящее время ИФА применяется в следующих ситуациях:

1) Поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;2) поиск антигенов каких-либо заболеваний (инфекционных, венерологических);3) исследование гормонального статуса пациента;4) обследование на онкомаркеры;

5) обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.

Преимущества метода ИФА:

1) Высокая специфичность и чувствительность метода ИФА (более 90%).2) Возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнивание количества антител в разных временных промежутках.

3) Доступность ИФА-диагностики в любом медицинском учреждении.

Относительный недостаток:

1) Выявление иммунного ответа (антител), но не самого возбудителя.

Основные понятия

Перед тем, как прояснить суть метода ИФА, кратко разберемся в некоторых понятиях.
Антитела (или иммуноглобулины – Ig) – специфические белки, вырабатываемые B –
лимфоцитами (иммунные клетки) в ответ на попадание в организм какого-либо инфекционного патогена (вирусы, бактерии, грибы и др).

Выделяют иммуноглобулины А (IgA), иммуноглобулины Е (IgE), иммуноглобулины М (IgM), иммуноглобулины G (IgG), иммуноглобулины D (IgD). Отличаются они друг от друга молекулярной формой и массой, периодом полураспада, участием/неучастием в инфекционных процессах, сроками обнаружения с момента инфицирования.

Если рассмотреть молекулярный вес, то больше всего он у IgM – это пентамер (950 000 дальтон) в отличие от остальных Ig (от 150 до 200 000 Да), благодаря чему IgM просто не могут проходить через плацентарный барьер. Поэтому обнаружение IgM у ребенка 1 года жизни всегда является признаком наличия инфекции у плода.

В сыворотке крови основная масса иммуноглобулинов представлена именно IgG (75-85%), а самая низкая – IgE (0,003%). В инфекционном процессе непосредственное участие принимают только IgA, M, G.

IgE являются признаком аллергических реакций и заболеваний, а IgD – можно обнаружить лишь в ткани лимфоузлов и миндалин, играет роль в формировании местного иммунитета.

Классы иммуноглобулинов

Антигены – высокомолекулярные вещества органического происхождения, в частности возбудителей инфекционных и других заболеваний, а также вещества различных измененных клеток, образующихся при той или иной болезни (аутоиммунные заболевания, онкология).

Иммунный комплекс – комплекс антиген-антитело, участвующий в иммунном процессе.

На чем основан метод ИФА

Выделяют несколько разновидностей ИФА (прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный), однако на практике чаще всего используется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)

Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса: антиген-антитело, в результате которого происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.

Суть метода ИФА

Простым языком этот процесс можно разделить на несколько этапов:

1) На поверхности лунок планшета доктора, проводящего обследование, находится очищенный антиген определенного возбудителя. При добавлении биологического материала (сыворотки крови) пациента происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом (иммуноглобулином). Это соединение будет выступать «особым антигеном» в следующем этапе.

2) На данном этапе идет образование ИК (иммунных комплексов) – реакция между «особым антигеном» и конъюгатом (это иммуноглобулин, меченый ферментом пероксидазой). Добавляется особый хромоген.

Результатом такой ферментативной реакции является образование окрашенного вещества в лунке планшета, интенсивность окраски которого зависит от количества содержащихся в материале пациента иммуноглобулинов (антител).

3) Далее происходит оценка результата: фотометрирование с помощью многоканального спектрофотометра, сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб, математическая обработка результатов. Количество антител у пациента напрямую зависит от высоты оптической плотности данной лунки.

Обычно на практике используют 96 луночные планшеты.

При измерении оптической плотности (ОП) исследуемой жидкости подсчитывается количество (или концентрация) антител в определенной единице объема. Затем результат сравнивается с контрольным образцом.

Нужно помнить:для каждой тест-системы разрабатываются индивидуальные показатели для учета результатов, показатели нормы и патологии (то есть «референтные значения»).

Это нужно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования. Некорректно интерпретировать результаты одной лаборатории по «референтным значениям» другой лаборатории.

Также некорректно сравнивать результаты разных лабораторий между собой.

При постановке реакций ИФА имеет значение и такое понятие как авидность антител.

Авидность антител – это прочность связи антитела с антигеном и то количество антигена, находящегося во взаимосвязи с иммноглобулинами (антителами).

Авидность имеет большое значение при оценке предполагаемого срока инфицирования, что чрезвычайно важно при диагностике первичного инфицирования у беременных.

Основа теста на авидность антител состоит из обработки иммунного комплекса (антиген-антитело) раствором мочевины с целью разрушения белка. Высокоавидные связи остаются целыми, а низкоавидные разрушаются. Результат выдается в виде индекса авидности, выражаемого в процентах (%).

Какие заболевания выявляются с помощью ИФА-диагностики?

1. Инфекционные заболевания1.1 Вирусные гепатиты А (IgM, G), В антигены -HBsAg, HBeAg, антитела – IgM HBcorAg, Ig суммарные HBcorAg, IgG HBeAg), С (антитела Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) и другие.1.2 ВИЧ-инфекция (IgG)1.3 Цитомегаловирусная инфекция (антитела IgM, G)1.

4 Эпштейн-Барр инфекция или мононклеоз (антитела IgM, G к EA, VCA, NA белкам вируса)1.5 Герпетические инфекции (антитела IgM, G)1.6 Токсоплазмоз (антитела IgM, G)1.7 Краснуха (IgM, G)1.

8 Корь (IgM, G), Бруцеллез (IgM, G), Псевдотуберкулез (IgM, G), Салмонеллез (IgM, G), Шигеллез или дизентерия (IgM, G), Аспергиллез (IgM, G), Клещевой энцефалит, Боррелиоз и многие другие.1.9 Паразитозы (лямблиоз, токсокароз, трихинеллез, описторхоз, эхинококкоз, альвеококкоз и другие), при которых выявляются IgG1.

10 ЗППП (заболевания, передающиеся половым путем) – Микоплазмоз (IgM, G), Уреаплазмоз (IgM, G), Хламидиоз (IgA, M, G), Сифилис (IgG)
1.11 Хеликобактерная инфекция (IgG)

2. Маркеры аутоиммунных заболеваний и показатели иммунитета человека (общий IgE, общий IgG, общий IgA, общий IgM, общий IgD, секреторный IgA, IgG 2, IgG4, ЦИК-циркулирующие иммунные комплексы, IgA и IgG к глиадину и другие)

3. Онкологичсекие маркеры (ФНО – фактор некроза опухоли, РЭА – раково-эмбриональный антиген, ПСА – простатспецифический антиген, ХГ – хорионический гонадотропин, СА 125, альвеомуцин и многие другие)

4. Репродуктивные нарушения (эстрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, АФП- альфафетопротеин, ФСГ – фолликулостимулирующий гормон и другие)

5. Заболевания щитовидной железы (свободные и связанные Т3, Т4, тиреоглобулин, тиреопероксидаза – ТПО, тиреотропный гормон – ТТГ).

Данный список представлен далеко не всеми заболеваниями, которые диагностируются с помощью иммуноферментного анализа.

Материал для ИФА анализа и правила его забора

Наиболее распространенный материал для реакции ИФА – это сыворотка крови пациента, взятая натощак. Материалом также могут служить спинномозговая жидкость, околоплодные воды, содержимое стекловидного тела, слизь цервикального канала и уретры, мазки.

Подготовка пациентов к сдаче материала для ИФА

Кровь забирается натощак. Перед сдачей крови не нужно принимать никакие препараты. Специфическое лечение (антибактериальное, противовирусное, противопаразитарное и прочее) нужно прекратить не менее, чем за 2 недели до исследования.

Сроки изготовления ИФА

Иммуноферментный анализ материала проводится быстро, в течение суток. Задержки могут быть в разных лабораториях из-за накопления определенного количества сывороток.

Возможные результаты ИФА-диагностики

При оценке результатов на конкретные инфекции имеет значение класс обнаруженных антител и их количество. От этого зависит не только вопрос этиологии инфекции (есть она или нет), но и предполагаемая стадия заболевания (острая, хроническая), а также наличие активной инфекции (острой или обострения хронической) на момент обследования.

Каковы приблизительные сроки появления антител (иммуноглобулинов – Ig)?

Самыми ранними антителами являются IgM. Выявить их можно через 1-3 недели после возможного инфицирования, что характеризует острую фазу инфекционного процесса.

Вторая ситуация появления антител IgM – активация (или обострение) хронического процесса. Антитела IgM циркулируют в среднем около 3х месяцев, затем их количество постепенно исчезает.

Однако у некоторых пациентов следовые количества IgM могут обнаруживаться в течение 1-2х лет с момента инфицирования.

Современные тест-системы обладают высокой чувствительностью, вследствие чего встречаются неспецифические ложноположительные результаты (нередко у беременных). Поэтому у данной группы пациентов положительные IgM нужно перепроверять!

Антитела IgA появляются через 2-4 недели после инфицирования, но в количестве, достаточном для обнаружения – через месяц. Сывороточные IgA синтезируются плазматическими клетками селезенки, лимфоузлов и слизистых оболочек,Секреторные IgA концентрируются на слизистых оболочках для выполнения своей защитной функции – участвуют в местном иммунитете.

С 4й недели после инфицирования начинают появляться антитела IgG.

При большинстве инфекций титр их постепенно увеличивается с максимумом в разные сроки (в среднем через 1,5-2 мес), далее титр остается на невысоком уровне и указывает на иммунитет.

При некоторых заболеваниях (микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз) уровень IgG не бывает высоким, снижается существенно из-за отсутствия иммунитета при данных инфекциях.

Варианты обнаружения антител разных классов:

– Изолированное обнаружение антител IgM предполагает наличие первичногоинфицирования.- Одновременное выявление в крови IgM и IgG характерно для первичного инфицированияв предыдущие 2-3 месяца, а также при обострении хронического заболевания.

Следовательно, при беременности наличие IgM не всегда является признаком первичного инфицирования.- Выявление изолированно IgG может указывать как на иммунитет к данному заболеванию,так и на хроническую инфекцию.

Во второй ситуации имеет значение и количество антител (титр), и изменение этого титра в динамике. Обычно исследования проводят с интервалом в 2-4-6 недель.- Обнаружение IgA изолировано или с IgM указывают на первичную инфекцию.

При

появлении IgA вместе с IgG предполагается активация хронической инфекции (в среднем 2 недели от момента обострения).

Определение авидности антител IgG является прекрасным дополняющим этапом диагностики первичной инфекции от давнего заражения, что имеет свое клиническое значение, прежде всего, при оценке риска внутриутробного заражения плода.

Обнаружение низкоавидных IgG указывает на первичную инфекцию и выявляются в среднем спустя 4-6 месяцев после инфицирования, реже дольше. Низкоавидные IgG требуют других лабораторных подтверждений первичного инфицирования (IgM).

Высокоавидные антитела являются либо признаком хронического заболевания и его обострения, либо сформировавшегося иммунитета.

Особенности у детей грудного возраста:у детей до года, а иногда и 1,5 лет в крови циркулируют материнские IgG к разным инфекциям (то есть произошло их проникновение через плаценты от матери к плоду в период внутриутробного развития).

Она не являются сами по себе признаком наличия инфекции в настоящем.

Если же в такjм возрасте обнаруживаются IgM (напомним, что материнские IgM проникнуть через плаценту не могут), то это признак внутриутробного инфицирования или приобретенной после рождения инфекции.

Количественный ИФА-метод

Результат ИФА-диагностики (с помощью иммуноферментного анализатора) выдается в определенных единицах измерения:- Оптическая плотность (ОП) пробы – концентрация специфических антител в единице объема. Чем выше ОП пробы, тем выше концентрация антител. В некоторых результатах говорится о коэффициенте позитивности (КП) – это тоже оптическая плотность образца.

– Единицы концентрации антител (нанограмм/ миллилитр или нг/мл). – В виде титров сывороток: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и так далее. Диагностические титры (при которых ставится диагноз именно болезни, а не факт инфицирования) для разных болезней разные.- В виде символов – «+», «-», «?» (+, ++, +++, ++++).

– В виде качественной оценки по заданному критерию (положительно или отрицательно).

Правильно оценить количество антител, вариант классового выявления иммуноглобулинов, а, следовательно, выставить стадию болезни и необходимость лечения может только врач.

Нельзя забывать, что для любой тест-системы разрабатываются свои «референтные значения» (варианты нормы), при превышении которых и диагностируется то или иное заболевание (варианты патологии). Для разных тест-систем «референтные значения» различные.

Корректное сравнивание результатов ИФА, взятых в динамике, возможно только в случае их изготовления в одной и той же лаборатории.

Врач инфекционист Быкова Н.И.

Источник: https://medicalj.ru/diacrisis/d-immunology/1025-ifa

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.